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歐際醫(yī)藥依托擁有實(shí)驗(yàn)動物使用許可證的實(shí)驗(yàn)動物中心進(jìn)行合作,為您提供主要包括模型制備、受試物給藥、標(biāo)本采集、功能指標(biāo)檢測等技術(shù)服務(wù)。
服務(wù)目錄號:#OGF-003
服務(wù)項(xiàng)目:輔助改善記憶功能評價(jià)
服務(wù)內(nèi)容:
1.跳臺實(shí)驗(yàn)、避暗實(shí)驗(yàn)、穿梭箱實(shí)驗(yàn)(雙向回避實(shí)驗(yàn))、水迷宮實(shí)驗(yàn)(任選其一)
2.選用雄近交系小鼠,斷乳鼠或成年鼠(18-22g),用于改善老年人記憶的產(chǎn)品必須采用成年鼠,雌雄均可,單一性別,每組10-15 只。
3.實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)劑量組和一個(gè)陰性對照組,以人體推薦量的10 倍為其中的一個(gè)劑量組,另設(shè)二個(gè)劑量組,必要時(shí)設(shè)陽性對照組。受試樣品給予時(shí)間30 天,必要時(shí)可延長至45天。
4.結(jié)果判定:跳臺實(shí)驗(yàn)、避暗實(shí)驗(yàn)、穿梭箱實(shí)驗(yàn)、水迷宮實(shí)驗(yàn)四項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中任二項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。且重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致(所重復(fù)的同一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)兩次結(jié)果均為陽性),可以判定該受試樣品輔助改善記憶動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。
客戶提供:受試樣品、陽性對照品
歐際提交:詳細(xì)研究報(bào)告
服務(wù)周期:3個(gè)月
服務(wù)目錄號:#OGF-003-1
模型名稱:跳臺實(shí)驗(yàn)
原理:反應(yīng)箱底鋪有通36v 電的銅柵,動物受到電擊,其正常反應(yīng)是跳上箱內(nèi)絕緣的平臺以避免傷害性刺激。多數(shù)動物可能再次或多次跳至銅柵上,受到電擊又迅速跳回平臺,如此訓(xùn)練5min,并記錄每鼠受到電擊的次數(shù)或叫錯(cuò)誤次數(shù),以此作為學(xué)習(xí)成績。24h 或 48h 重作測驗(yàn),此即記憶保持測驗(yàn)。記錄受電擊的動物數(shù)、第一次跳下平臺的潛伏期和3min 內(nèi)的錯(cuò)誤總數(shù)。停止訓(xùn)練 5 天后(也可以在訓(xùn)練后的一周、兩周或其它時(shí)間點(diǎn))進(jìn)行記憶消退實(shí)驗(yàn)。
受試樣品對正常小鼠記憶的影響:末次給樣后次日(或一次給樣后1h)開始訓(xùn)練。將動物放入反應(yīng)箱內(nèi)(臺上、臺下)適應(yīng)環(huán)境 3min,然后將動物放置反應(yīng)箱內(nèi)的銅柵上,立即通以36v 的交流電。動物受到電擊,其正常反應(yīng)是跳回平臺(絕緣體),以躲避傷害性刺激。多數(shù)動物可能再次或多次跳至銅柵上,受到電擊又迅速跳回平臺上。訓(xùn)練一次后,將動物放在反應(yīng)箱內(nèi)的平臺上,記錄5min 內(nèi)各鼠跳下平臺的錯(cuò)誤次數(shù)和第一次跳下平臺的潛伏期,以此作為學(xué)習(xí)成績。24 或 48h 后進(jìn)行重測驗(yàn),將小鼠放在平臺上,記錄各鼠第一次跳下平臺的潛伏期、各鼠 3min 內(nèi)電擊次數(shù)和受電擊的動物數(shù)總數(shù),同時(shí)計(jì)算出現(xiàn)錯(cuò)誤反應(yīng)的動物的百分率(受電擊的動物數(shù)占該組動物總數(shù)的百分率)。停止訓(xùn)練5 天后(包括第 5 天)可以在不同的時(shí)間進(jìn)行一次或多次記憶消退實(shí)驗(yàn)(方法同重測驗(yàn))。
受試樣品對記憶障礙模型小鼠的影響:
造模:記憶獲得障礙模型制造:訓(xùn)練前10min 腹腔注射樟柳堿或東莨菪堿 5mg/kg BW;
記憶鞏固障礙模型制造:訓(xùn)練前10min 腹腔注射環(huán)已酰亞胺 120mg/kg BW;
記憶再現(xiàn)障礙模型制造:重測驗(yàn)前30min 灌胃 30%的乙醇 10mL/kg BW。
數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定:潛伏期結(jié)果為計(jì)量資料,可用方差分析,但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),方差齊,計(jì)算F值,F(xiàn) 值<F0.05,結(jié)論:各組均數(shù)間差異無顯著性;F 值≥F0.05,P≤0.05,用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì);對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換,待滿足正態(tài)或方差齊要求后,用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì);若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的,改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
錯(cuò)誤次數(shù)和3min 內(nèi)跳下平臺的動物數(shù)均為記數(shù)資料,可用c2檢驗(yàn),四格表總例數(shù)小于40,或總例數(shù)等于或大于40 但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于1時(shí),應(yīng)改用確切概率法。
若受試樣品組與對照組比較,潛伏期明顯延長,錯(cuò)誤次數(shù)或跳下平臺的動物數(shù)明顯少于對照組,差異有顯著性,以上三項(xiàng)指標(biāo)中,任一項(xiàng)指標(biāo)陽性,均可判定該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)陽性。
服務(wù)目錄號:#OGF-003-2
模型名稱:避暗法實(shí)驗(yàn)
原理:利用小鼠嗜暗的習(xí)性設(shè)計(jì)一個(gè)裝置,一半是暗室,一半是明室,中間有一小洞相連。暗室底部鋪有通電的銅柵,并與一計(jì)時(shí)器相連,計(jì)時(shí)器可自動記錄潛伏期的時(shí)間。小鼠進(jìn)入暗室即受到電擊,計(jì)時(shí)自動停止。
儀器和試劑:避暗儀:該裝置分明暗兩室。明室大小為12cm×4.5cm,其上方約 20cm 處懸一 40w 鎢燈絲。暗室較大,大小為17cm×4.5cm,兩室之間有一直徑約 3cm 的圓洞。兩室底部均鋪以銅柵。暗室底部中間位置的銅柵可以通電,電擊強(qiáng)度可在一旋鈕上任意選擇。一般采用40v 電壓。暗室與一計(jì)時(shí)器相連,計(jì)時(shí)器可自動記錄潛伏期的時(shí)間。
試劑:樟柳堿、東莨菪堿、環(huán)己酰亞胺、乙醇。
受試樣品對正常小鼠記憶的影響:末次給樣后次日(或一次給樣后1h)開始訓(xùn)練。實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠面部背向洞口放入明室,同時(shí)啟動計(jì)時(shí)器。動物穿過洞口進(jìn)入暗室受到電擊,計(jì)時(shí)器自動停止,取出小鼠,記錄每鼠從放入明室至進(jìn)入暗室遭電擊所需的時(shí)間,此即潛伏期,訓(xùn)練5min,并記錄 5min 內(nèi)電擊次數(shù)。24h 或 48h 后重作測驗(yàn),記錄每只動物進(jìn)入暗室的潛伏期和5min 內(nèi)的電擊次數(shù),并計(jì)算 5min 內(nèi)進(jìn)入暗室(錯(cuò)誤反應(yīng))的動物百分率。停止訓(xùn)練 5 天后可以在不同的時(shí)間進(jìn)行一次或多次記憶消退實(shí)驗(yàn)。
數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定:潛伏期時(shí)間為計(jì)量資料,可用方差分析,但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),方差齊,計(jì)算F值,F(xiàn) 值<F0.05,結(jié)論:各組均數(shù)間差異無顯著性;F 值≥F0.05,P≤0.05,用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì);對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換,待滿足正態(tài)或方差齊要求后,用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì);若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的,改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。5min 內(nèi)進(jìn)入暗室的次數(shù)和 5min 內(nèi)進(jìn)入暗室的動物數(shù)均為計(jì)數(shù)資料,可用c2檢驗(yàn),四格表總例數(shù)小于 40,或總例數(shù)等于或大于40 但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于 1 時(shí),應(yīng)改用確切概率法。若受試樣品組小鼠進(jìn)入暗室的潛伏期明顯長于對照組,5min 內(nèi)進(jìn)入暗室的錯(cuò)誤次數(shù)或 5min 內(nèi)進(jìn)入暗室的動物數(shù)少于對照組,且差異有顯著性,以上三項(xiàng)指標(biāo)中任一項(xiàng)指標(biāo)陽性,均可判定該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)陽性。
服務(wù)目錄號:#OGF-003-3
模型名稱:穿梭箱實(shí)驗(yàn)(雙向回避實(shí)驗(yàn))
儀器與試劑:儀器:大鼠穿梭箱。該裝置由實(shí)驗(yàn)箱和自動記錄打印裝置組成。實(shí)驗(yàn)箱大小為50cm×16cm×18cm。箱底部格柵為可以通電的不銹鋼棒,箱底中央部有一高1.2cm 擋板,將箱底部分隔成左右兩側(cè)。實(shí)驗(yàn)箱頂部有光源和蜂鳴音控制器,自動記錄打印裝置可連續(xù)自動記錄動物對電刺激(燈光或/和蜂鳴器)的反應(yīng)和潛伏期,并將結(jié)果打印出來。
試劑:樟柳堿,東莨菪堿,環(huán)已酰亞胺,乙醇
受試樣品對正常大鼠條件反射建立的影響:末次給樣后次日(或一次給樣后1h)開始訓(xùn)練。將大鼠放入箱內(nèi)任何一側(cè),20s 后開始呈現(xiàn)燈光或蜂鳴音,持續(xù)20s,后 10s 內(nèi)同時(shí)給以電刺激(100V,0.2mA,50Hz,AC)。大鼠在遭電擊后即逃避,必須跑到對側(cè)頂端,擋住光電管后才可中斷電擊,此為被動回避反應(yīng),在每次電擊前給予條件刺激,反復(fù)強(qiáng)化后,大鼠在接受條件刺激后即跳向?qū)?cè)并擋住光電管而逃避電擊,此為主動回避反應(yīng),每隔天訓(xùn)練一回,每回50次,連續(xù)訓(xùn)練4-5 回后,動物的主動回避反應(yīng)率可達(dá) 80-90%以上。根據(jù)打印結(jié)果分析如下指標(biāo):動物反應(yīng)次數(shù),動物主動回避時(shí)間,動物被動回避時(shí)間,動物主動回避率。停止訓(xùn)練5-50 天內(nèi),分 2-3 次測定其記憶消退情況。
數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定:動物主動回避時(shí)間和被動回避時(shí)間為計(jì)量資料,可用方差分析,但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),方差齊,計(jì)算F 值,F(xiàn) 值<F0.05,結(jié)論:各組均數(shù)間差異無顯著性;F 值≥F0.05,P≤0.05,用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì);對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換,待滿足正態(tài)或方差齊要求后,用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì);若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的,改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。若實(shí)驗(yàn)組主動和/或被動回避時(shí)間明顯短于對照組,差異有顯著性,可判定為該指標(biāo)陽性。
服務(wù)目錄號:#OGF-003-3
模型名稱:水迷宮實(shí)驗(yàn)
原理:動物都有一種“探索”和“更替”傾向,當(dāng)離開一個(gè)臂時(shí),總是跑向“久”未跑過的“新”臂。小鼠不愿在水中,因而尋找能爬出水面的階梯,訓(xùn)練后,小鼠能記住找到階梯的路線。
儀器與試劑:水迷宮自動記錄儀。該儀器是由迷宮游泳箱和自動記錄儀兩部分組成。迷宮游泳箱由聚乙烯塑料制成,長100cm、寬 100cm、高 30cm;內(nèi)徑長 90cm、寬 90cm、高 30cm,泳道寬 12cm,泳道走向固定。見附圖。
受試樣品對正常小鼠記憶的影響:連續(xù)給樣30 天,末次給樣次日開始訓(xùn)練。訓(xùn)練期間繼續(xù)給樣,每天一次。迷宮泳道水深 9cm,水溫約20℃(≮15℃)。將小鼠訓(xùn)練時(shí)間限定為 2min,在 2min 內(nèi)未到達(dá)終點(diǎn)的小鼠均記為 2min。第一次訓(xùn)練前將小鼠放在梯子附近,使其自動爬上3 次。以后每次訓(xùn)練前將小鼠放在梯子附近,背朝樓梯,使其自動爬上1 次。實(shí)驗(yàn)分階段進(jìn)行,視動物學(xué)習(xí)成績逐步加長路程。第一次訓(xùn)練時(shí)用一擋板在 A 處檔死,從A 處開始訓(xùn)練,記錄從 A 點(diǎn)到達(dá)終點(diǎn)的時(shí)間。第二次訓(xùn)練加長路程,從 B 處開始,此路程約訓(xùn)練 3
次,至動物數(shù)80%以上在 2min 內(nèi)達(dá)到終點(diǎn)后再延長路程,分別記錄各鼠每次從 B 點(diǎn)到達(dá)終點(diǎn)所需的時(shí)間和發(fā)生錯(cuò)誤的次數(shù)(進(jìn)入任何一個(gè)盲端一次均算一次錯(cuò)誤)。末次測試從起點(diǎn)進(jìn)行,將小鼠放在起點(diǎn),記錄從起點(diǎn)到達(dá)終點(diǎn)所需的時(shí)間和發(fā)生錯(cuò)誤的次數(shù)。每次訓(xùn)練時(shí),對2min 內(nèi)未達(dá)到終點(diǎn)的小鼠,應(yīng)引導(dǎo)其到達(dá)終點(diǎn),從終點(diǎn)的樓梯上來,達(dá)到訓(xùn)練的目的。每次訓(xùn)練或測驗(yàn)時(shí)均將頭朝起始點(diǎn)。最后計(jì)算各組動物5 次訓(xùn)練和測試的總錯(cuò)誤次數(shù),到達(dá)終點(diǎn)的總時(shí)間及2min 內(nèi)到達(dá)終點(diǎn)的總動物數(shù)(百分率),停止訓(xùn)練 5 天后可在不同的時(shí)間從起點(diǎn)進(jìn)行消退實(shí)驗(yàn)。
數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定:到達(dá)終點(diǎn)的時(shí)間屬計(jì)量資料,可用方差分析,但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),方差齊,計(jì)算F 值,F(xiàn) 值<F0.05,結(jié)論:各組均數(shù)間差異無顯著性;F 值≥F0.05,P≤0.05,用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì);對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換,待滿足正態(tài)或方差齊要求后,用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì);若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的,改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。錯(cuò)誤次數(shù)和到達(dá)終點(diǎn)的動物數(shù)(百分率)兩指標(biāo)為計(jì)數(shù)資料,可用χ2檢驗(yàn),四格表總例數(shù)小于40,或總
例數(shù)等于或大于40 但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于 1 時(shí),應(yīng)改用確切概率法。試驗(yàn)組與對照組比,試驗(yàn)組到達(dá)終點(diǎn)所用的時(shí)間或到達(dá)終點(diǎn)前的錯(cuò)誤次數(shù)明顯少于對照組,或2min 內(nèi)到達(dá)終點(diǎn)的動物數(shù)明顯多于對照組,且經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)差異有顯著性。其中任一項(xiàng)指標(biāo)為陽性,可判為該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)陽性。
歐際醫(yī)藥依托擁有實(shí)驗(yàn)動物使用許可證的實(shí)驗(yàn)動物中心進(jìn)行合作,為您提供主要包括模型制備、受試物給藥、標(biāo)本采集、功能指標(biāo)檢測等技術(shù)服務(wù)。
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服務(wù)項(xiàng)目:輔助改善記憶功能評價(jià)
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1.跳臺實(shí)驗(yàn)、避暗實(shí)驗(yàn)、穿梭箱實(shí)驗(yàn)(雙向回避實(shí)驗(yàn))、水迷宮實(shí)驗(yàn)(任選其一)
2.選用雄近交系小鼠,斷乳鼠或成年鼠(18-22g),用于改善老年人記憶的產(chǎn)品必須采用成年鼠,雌雄均可,單一性別,每組10-15 只。
3.實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)劑量組和一個(gè)陰性對照組,以人體推薦量的10 倍為其中的一個(gè)劑量組,另設(shè)二個(gè)劑量組,必要時(shí)設(shè)陽性對照組。受試樣品給予時(shí)間30 天,必要時(shí)可延長至45天。
4.結(jié)果判定:跳臺實(shí)驗(yàn)、避暗實(shí)驗(yàn)、穿梭箱實(shí)驗(yàn)、水迷宮實(shí)驗(yàn)四項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中任二項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。且重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致(所重復(fù)的同一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)兩次結(jié)果均為陽性),可以判定該受試樣品輔助改善記憶動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。
客戶提供:受試樣品、陽性對照品
歐際提交:詳細(xì)研究報(bào)告
服務(wù)周期:3個(gè)月
服務(wù)目錄號:#OGF-003-1
模型名稱:跳臺實(shí)驗(yàn)
原理:反應(yīng)箱底鋪有通36v 電的銅柵,動物受到電擊,其正常反應(yīng)是跳上箱內(nèi)絕緣的平臺以避免傷害性刺激。多數(shù)動物可能再次或多次跳至銅柵上,受到電擊又迅速跳回平臺,如此訓(xùn)練5min,并記錄每鼠受到電擊的次數(shù)或叫錯(cuò)誤次數(shù),以此作為學(xué)習(xí)成績。24h 或 48h 重作測驗(yàn),此即記憶保持測驗(yàn)。記錄受電擊的動物數(shù)、第一次跳下平臺的潛伏期和3min 內(nèi)的錯(cuò)誤總數(shù)。停止訓(xùn)練 5 天后(也可以在訓(xùn)練后的一周、兩周或其它時(shí)間點(diǎn))進(jìn)行記憶消退實(shí)驗(yàn)。
受試樣品對正常小鼠記憶的影響:末次給樣后次日(或一次給樣后1h)開始訓(xùn)練。將動物放入反應(yīng)箱內(nèi)(臺上、臺下)適應(yīng)環(huán)境 3min,然后將動物放置反應(yīng)箱內(nèi)的銅柵上,立即通以36v 的交流電。動物受到電擊,其正常反應(yīng)是跳回平臺(絕緣體),以躲避傷害性刺激。多數(shù)動物可能再次或多次跳至銅柵上,受到電擊又迅速跳回平臺上。訓(xùn)練一次后,將動物放在反應(yīng)箱內(nèi)的平臺上,記錄5min 內(nèi)各鼠跳下平臺的錯(cuò)誤次數(shù)和第一次跳下平臺的潛伏期,以此作為學(xué)習(xí)成績。24 或 48h 后進(jìn)行重測驗(yàn),將小鼠放在平臺上,記錄各鼠第一次跳下平臺的潛伏期、各鼠 3min 內(nèi)電擊次數(shù)和受電擊的動物數(shù)總數(shù),同時(shí)計(jì)算出現(xiàn)錯(cuò)誤反應(yīng)的動物的百分率(受電擊的動物數(shù)占該組動物總數(shù)的百分率)。停止訓(xùn)練5 天后(包括第 5 天)可以在不同的時(shí)間進(jìn)行一次或多次記憶消退實(shí)驗(yàn)(方法同重測驗(yàn))。
受試樣品對記憶障礙模型小鼠的影響:
造模:記憶獲得障礙模型制造:訓(xùn)練前10min 腹腔注射樟柳堿或東莨菪堿 5mg/kg BW;
記憶鞏固障礙模型制造:訓(xùn)練前10min 腹腔注射環(huán)已酰亞胺 120mg/kg BW;
記憶再現(xiàn)障礙模型制造:重測驗(yàn)前30min 灌胃 30%的乙醇 10mL/kg BW。
數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定:潛伏期結(jié)果為計(jì)量資料,可用方差分析,但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),方差齊,計(jì)算F值,F(xiàn) 值<F0.05,結(jié)論:各組均數(shù)間差異無顯著性;F 值≥F0.05,P≤0.05,用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì);對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換,待滿足正態(tài)或方差齊要求后,用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì);若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的,改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
錯(cuò)誤次數(shù)和3min 內(nèi)跳下平臺的動物數(shù)均為記數(shù)資料,可用c2檢驗(yàn),四格表總例數(shù)小于40,或總例數(shù)等于或大于40 但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于1時(shí),應(yīng)改用確切概率法。
若受試樣品組與對照組比較,潛伏期明顯延長,錯(cuò)誤次數(shù)或跳下平臺的動物數(shù)明顯少于對照組,差異有顯著性,以上三項(xiàng)指標(biāo)中,任一項(xiàng)指標(biāo)陽性,均可判定該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)陽性。
服務(wù)目錄號:#OGF-003-2
模型名稱:避暗法實(shí)驗(yàn)
原理:利用小鼠嗜暗的習(xí)性設(shè)計(jì)一個(gè)裝置,一半是暗室,一半是明室,中間有一小洞相連。暗室底部鋪有通電的銅柵,并與一計(jì)時(shí)器相連,計(jì)時(shí)器可自動記錄潛伏期的時(shí)間。小鼠進(jìn)入暗室即受到電擊,計(jì)時(shí)自動停止。
儀器和試劑:避暗儀:該裝置分明暗兩室。明室大小為12cm×4.5cm,其上方約 20cm 處懸一 40w 鎢燈絲。暗室較大,大小為17cm×4.5cm,兩室之間有一直徑約 3cm 的圓洞。兩室底部均鋪以銅柵。暗室底部中間位置的銅柵可以通電,電擊強(qiáng)度可在一旋鈕上任意選擇。一般采用40v 電壓。暗室與一計(jì)時(shí)器相連,計(jì)時(shí)器可自動記錄潛伏期的時(shí)間。
試劑:樟柳堿、東莨菪堿、環(huán)己酰亞胺、乙醇。
受試樣品對正常小鼠記憶的影響:末次給樣后次日(或一次給樣后1h)開始訓(xùn)練。實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠面部背向洞口放入明室,同時(shí)啟動計(jì)時(shí)器。動物穿過洞口進(jìn)入暗室受到電擊,計(jì)時(shí)器自動停止,取出小鼠,記錄每鼠從放入明室至進(jìn)入暗室遭電擊所需的時(shí)間,此即潛伏期,訓(xùn)練5min,并記錄 5min 內(nèi)電擊次數(shù)。24h 或 48h 后重作測驗(yàn),記錄每只動物進(jìn)入暗室的潛伏期和5min 內(nèi)的電擊次數(shù),并計(jì)算 5min 內(nèi)進(jìn)入暗室(錯(cuò)誤反應(yīng))的動物百分率。停止訓(xùn)練 5 天后可以在不同的時(shí)間進(jìn)行一次或多次記憶消退實(shí)驗(yàn)。
數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定:潛伏期時(shí)間為計(jì)量資料,可用方差分析,但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),方差齊,計(jì)算F值,F(xiàn) 值<F0.05,結(jié)論:各組均數(shù)間差異無顯著性;F 值≥F0.05,P≤0.05,用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì);對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換,待滿足正態(tài)或方差齊要求后,用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì);若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的,改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。5min 內(nèi)進(jìn)入暗室的次數(shù)和 5min 內(nèi)進(jìn)入暗室的動物數(shù)均為計(jì)數(shù)資料,可用c2檢驗(yàn),四格表總例數(shù)小于 40,或總例數(shù)等于或大于40 但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于 1 時(shí),應(yīng)改用確切概率法。若受試樣品組小鼠進(jìn)入暗室的潛伏期明顯長于對照組,5min 內(nèi)進(jìn)入暗室的錯(cuò)誤次數(shù)或 5min 內(nèi)進(jìn)入暗室的動物數(shù)少于對照組,且差異有顯著性,以上三項(xiàng)指標(biāo)中任一項(xiàng)指標(biāo)陽性,均可判定該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)陽性。
服務(wù)目錄號:#OGF-003-3
模型名稱:穿梭箱實(shí)驗(yàn)(雙向回避實(shí)驗(yàn))
儀器與試劑:儀器:大鼠穿梭箱。該裝置由實(shí)驗(yàn)箱和自動記錄打印裝置組成。實(shí)驗(yàn)箱大小為50cm×16cm×18cm。箱底部格柵為可以通電的不銹鋼棒,箱底中央部有一高1.2cm 擋板,將箱底部分隔成左右兩側(cè)。實(shí)驗(yàn)箱頂部有光源和蜂鳴音控制器,自動記錄打印裝置可連續(xù)自動記錄動物對電刺激(燈光或/和蜂鳴器)的反應(yīng)和潛伏期,并將結(jié)果打印出來。
試劑:樟柳堿,東莨菪堿,環(huán)已酰亞胺,乙醇
受試樣品對正常大鼠條件反射建立的影響:末次給樣后次日(或一次給樣后1h)開始訓(xùn)練。將大鼠放入箱內(nèi)任何一側(cè),20s 后開始呈現(xiàn)燈光或蜂鳴音,持續(xù)20s,后 10s 內(nèi)同時(shí)給以電刺激(100V,0.2mA,50Hz,AC)。大鼠在遭電擊后即逃避,必須跑到對側(cè)頂端,擋住光電管后才可中斷電擊,此為被動回避反應(yīng),在每次電擊前給予條件刺激,反復(fù)強(qiáng)化后,大鼠在接受條件刺激后即跳向?qū)?cè)并擋住光電管而逃避電擊,此為主動回避反應(yīng),每隔天訓(xùn)練一回,每回50次,連續(xù)訓(xùn)練4-5 回后,動物的主動回避反應(yīng)率可達(dá) 80-90%以上。根據(jù)打印結(jié)果分析如下指標(biāo):動物反應(yīng)次數(shù),動物主動回避時(shí)間,動物被動回避時(shí)間,動物主動回避率。停止訓(xùn)練5-50 天內(nèi),分 2-3 次測定其記憶消退情況。
數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定:動物主動回避時(shí)間和被動回避時(shí)間為計(jì)量資料,可用方差分析,但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),方差齊,計(jì)算F 值,F(xiàn) 值<F0.05,結(jié)論:各組均數(shù)間差異無顯著性;F 值≥F0.05,P≤0.05,用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì);對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換,待滿足正態(tài)或方差齊要求后,用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì);若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的,改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。若實(shí)驗(yàn)組主動和/或被動回避時(shí)間明顯短于對照組,差異有顯著性,可判定為該指標(biāo)陽性。
服務(wù)目錄號:#OGF-003-3
模型名稱:水迷宮實(shí)驗(yàn)
原理:動物都有一種“探索”和“更替”傾向,當(dāng)離開一個(gè)臂時(shí),總是跑向“久”未跑過的“新”臂。小鼠不愿在水中,因而尋找能爬出水面的階梯,訓(xùn)練后,小鼠能記住找到階梯的路線。
儀器與試劑:水迷宮自動記錄儀。該儀器是由迷宮游泳箱和自動記錄儀兩部分組成。迷宮游泳箱由聚乙烯塑料制成,長100cm、寬 100cm、高 30cm;內(nèi)徑長 90cm、寬 90cm、高 30cm,泳道寬 12cm,泳道走向固定。見附圖。
受試樣品對正常小鼠記憶的影響:連續(xù)給樣30 天,末次給樣次日開始訓(xùn)練。訓(xùn)練期間繼續(xù)給樣,每天一次。迷宮泳道水深 9cm,水溫約20℃(≮15℃)。將小鼠訓(xùn)練時(shí)間限定為 2min,在 2min 內(nèi)未到達(dá)終點(diǎn)的小鼠均記為 2min。第一次訓(xùn)練前將小鼠放在梯子附近,使其自動爬上3 次。以后每次訓(xùn)練前將小鼠放在梯子附近,背朝樓梯,使其自動爬上1 次。實(shí)驗(yàn)分階段進(jìn)行,視動物學(xué)習(xí)成績逐步加長路程。第一次訓(xùn)練時(shí)用一擋板在 A 處檔死,從A 處開始訓(xùn)練,記錄從 A 點(diǎn)到達(dá)終點(diǎn)的時(shí)間。第二次訓(xùn)練加長路程,從 B 處開始,此路程約訓(xùn)練 3
次,至動物數(shù)80%以上在 2min 內(nèi)達(dá)到終點(diǎn)后再延長路程,分別記錄各鼠每次從 B 點(diǎn)到達(dá)終點(diǎn)所需的時(shí)間和發(fā)生錯(cuò)誤的次數(shù)(進(jìn)入任何一個(gè)盲端一次均算一次錯(cuò)誤)。末次測試從起點(diǎn)進(jìn)行,將小鼠放在起點(diǎn),記錄從起點(diǎn)到達(dá)終點(diǎn)所需的時(shí)間和發(fā)生錯(cuò)誤的次數(shù)。每次訓(xùn)練時(shí),對2min 內(nèi)未達(dá)到終點(diǎn)的小鼠,應(yīng)引導(dǎo)其到達(dá)終點(diǎn),從終點(diǎn)的樓梯上來,達(dá)到訓(xùn)練的目的。每次訓(xùn)練或測驗(yàn)時(shí)均將頭朝起始點(diǎn)。最后計(jì)算各組動物5 次訓(xùn)練和測試的總錯(cuò)誤次數(shù),到達(dá)終點(diǎn)的總時(shí)間及2min 內(nèi)到達(dá)終點(diǎn)的總動物數(shù)(百分率),停止訓(xùn)練 5 天后可在不同的時(shí)間從起點(diǎn)進(jìn)行消退實(shí)驗(yàn)。
數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定:到達(dá)終點(diǎn)的時(shí)間屬計(jì)量資料,可用方差分析,但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),方差齊,計(jì)算F 值,F(xiàn) 值<F0.05,結(jié)論:各組均數(shù)間差異無顯著性;F 值≥F0.05,P≤0.05,用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì);對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換,待滿足正態(tài)或方差齊要求后,用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì);若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的,改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。錯(cuò)誤次數(shù)和到達(dá)終點(diǎn)的動物數(shù)(百分率)兩指標(biāo)為計(jì)數(shù)資料,可用χ2檢驗(yàn),四格表總例數(shù)小于40,或總
例數(shù)等于或大于40 但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于 1 時(shí),應(yīng)改用確切概率法。試驗(yàn)組與對照組比,試驗(yàn)組到達(dá)終點(diǎn)所用的時(shí)間或到達(dá)終點(diǎn)前的錯(cuò)誤次數(shù)明顯少于對照組,或2min 內(nèi)到達(dá)終點(diǎn)的動物數(shù)明顯多于對照組,且經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)差異有顯著性。其中任一項(xiàng)指標(biāo)為陽性,可判為該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)陽性。